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發(fā)布時間：2017/11/14
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產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
Taq DNA聚合酶(5U/μL) | D1010L1177 | 200 U | -20 ℃ | 80
|
產(chǎn)品描述
本制品是94kDa的耐熱性DNA聚合酶，是把Thermus aquaticus DNA Polymerase基因在大腸桿菌中進行表達(dá)后經(jīng)多次純化分離而得到的。它與天然Taq DNA聚合酶具有相同的功能。使用本制品擴增得到的PCR產(chǎn)物的3´端附有一個"A"堿基，因此可直接克隆于T載體中。配以Life-iLab*配方的5×反應(yīng)緩沖液（已添加Mg2+）可獲得更加理想的擴增結(jié)果。
活性定義
在74℃條件下，30分鐘內(nèi)催化10nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個單位。
產(chǎn)品特點
：以入DNA為模板，擴增長度可達(dá)8kb，可以擴增≤4kb片段。
靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴增出特定基因片段。
高品質(zhì)：*Real Time PCR的實驗要求。
*配方的5×Buffer：使PCR擴增反應(yīng)更加穩(wěn)定、靈敏、。
產(chǎn)品用途
常規(guī)PCR鑒定；小片段目標(biāo)基因克??；平端PCR產(chǎn)物加A；雙脫氧法測序；熒光定量PCR。
使用建議
使用本試劑擴增得到的PCR產(chǎn)物3´ 端有一突出"A"堿基，可直接克隆于T載體中。如需擴增克隆較長片段建議換用Pfu DNA聚合酶。當(dāng)擴增大片段時，Taq酶的擴增效率大大低于Taq Plus酶，在>4Kb片段的PCR擴增中建議換用Taq Plus酶。
實用實例：
例1: 50μL擴增體系中，以5ngλDNA 為模板，對500bp～6.0kb
的擴增結(jié)果。
泳道M：1KB DNA Marker；
泳道1：0.5kb；泳道2：1.0kb；
泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb；
泳道5：4.0kb；泳道6：6.0kb；
例2: 50μL擴增體系中，分別以50ng～0.05ng人基因組DNA為模
板，可對特定基因片段（380bp）進行很好的擴增。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；
泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；
泳道M：DNA Ladder 2000 Marker
產(chǎn)品包裝
組份 | D1010L1177 | D1010L1178 |
Taq DNA 聚合酶(5U/μL) | 50μL | 200μL |
dNTPs混合液(各10mM) | 200μL | 1mL |
5×Taq Buffer with Mg2+ | 2mL | 10mL |
運輸和儲存
-20℃運輸和保存，避免反復(fù)凍融，在保存條件下可保存1年。
質(zhì)量保證
經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE檢測僅可見清晰單一的目的條帶；PCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留，無核酸內(nèi)、外切酶污染。
常用反應(yīng)體系 | 常用PCR程序 | |||
5 x Taq Buffer 上游引物 下游引物 dNTPs(個10mM) 模板 Taq DNA聚合酶 ddH2O | 10μL 0.2-1.0μM(終濃度) 0.2-1.0μM(終濃度) 1μL 1-50ng(質(zhì)粒)/10ng-1μg(基因組) 0.25μL(1.25U) 至50μL | 擴增片段<3k | 擴增片段≥3k | |
94℃ 90s 94℃ 20s 30次循環(huán) 57℃ 20s 72℃ 60s/kb 72℃ 5m 4℃ 保溫 | 94℃ 30次循環(huán) 72℃ 4℃ | 20s 94℃ 5s 68℃ 60s/kb 5min 保溫 | ||
注意事項使用方法
1、2mM Mg2+的終濃度可以滿足絕大多數(shù)PCR擴增，對于某些PCR，為了保證較好的擴增，可調(diào)節(jié)為2-4mM。
2、體系中加入推薦的酶量，可以滿足大多數(shù)PCR擴增，對于某些PCR，為了得到較好的擴增，可適當(dāng)增加酶量。
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