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產(chǎn)品中心PCR&q-PCRPCRAN11L8282 x Taq PCR Plus Mix
產(chǎn)品簡介
2 x Taq PCR Plus Mix是PCR 反應(yīng)預(yù)混液，其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應(yīng)緩沖液、loading Dye 等成分，使用時只需取適量本產(chǎn)品，加入模板和引物，并加入 ddH2O 補足體積，使反應(yīng)體系濃度為 1× 即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。
產(chǎn)品分類
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| 品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號 | AN11L828 |
|---|---|---|---|
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
產(chǎn)品描述
2 x Taq PCR Plus Mix 是PCR 反應(yīng)預(yù)混液，其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應(yīng)緩沖液、loading Dye 等成分，使用時只需取適量本產(chǎn)品，加入模板和引物，并加入 ddH2O 補足體積，使反應(yīng)體系濃度為 1× 即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。PCR 產(chǎn)物 3' 端帶突出 A 堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆。
本產(chǎn)品采用復(fù)合酶系統(tǒng)即Taq DNA聚合酶與3'→5'外切酶活性蛋白協(xié)同作用，可在優(yōu)化反應(yīng)緩沖體系下實現(xiàn)高產(chǎn)量擴(kuò)增，能擴(kuò)增≤7 kb的DNA片段，且兼容30%-70% GC含量的模板。相較于傳統(tǒng)Taq酶（WT-Taq），其延伸速率提升2-4倍，顯著縮短反應(yīng)周期。
本產(chǎn)品中包含兩種染料，PCR反應(yīng)完成后無需額外添加 loading buffer，可以直接進(jìn)行電泳，且電泳過程中會出現(xiàn)藍(lán)色和紅色兩個指示條帶。該染料不影響 PCR 擴(kuò)增效率，但對于需要對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行吸光度、熒光等光學(xué)分析的實驗，建議在分析前對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化，或使用無染料的PCR預(yù)混液。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
2 x Taq PCR Plus Mix | AN11L828 | 2*1mL |
2 x Taq PCR Plus Mix | AN11L829 | 5*1mL |
運輸與保存
藍(lán)冰運輸。-20℃保存，有效期24個月。
使用方法
1. 常規(guī) PCR 反應(yīng)體系（冰上操作）
組分 | 20 μL體系 | 50 μL體系 | 終濃度 |
2 x Taq PCR Plus Mix | 10 μL | 25 μL | 1 x |
正向引物（10 μM）（1） | 0.4-0.8 μL | 1-2 μL | 0.2-0.4 μM |
反向引物（10 μM）（1） | 0.4-0.8 μL | 1-2 μL | 0.2-0.4 μM |
DNA 模板（2） | X μL | X μL | - |
ddH2O | To 20 μL | To 50 μL | - |
(1) 引物推薦終濃度為 0.2~0.4 μM，效果不佳時可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整；
(2) 不同模板*佳反應(yīng)濃度有所不同，以 50 μL 體系為例：模板為基因組 DNA 時，一般推薦的使用量為 10~200 ng；當(dāng)模板為質(zhì)粒或病毒 DNA 時，一般推薦的使用量為 10 pg~5 ng。 模板量過多時容易造成非特異性擴(kuò)增。
2. 三步法 PCR 反應(yīng)程序
步驟 | 溫度 | 時間 |
預(yù)變性（3） | 95℃ | 3~5 min |
變性 | 95℃ | 30 sec |
退火（4） | 55~65℃ | 30 sec |
延伸（5） | 72℃ | 15~30 sec/kb |
30~35 Cycles | ||
終延伸 | 72℃ | 5min |
3. 兩步法 PCR 反應(yīng)程序
步驟 | 溫度 | 時間 |
預(yù)變性（3） | 95℃ | 3~5 min |
變性 | 95℃ | 30 sec |
退火和延伸（4） | 60~65℃ | 30 sec/kb |
30~35 Cycles | ||
終延伸 | 72℃ | 5min |
(3) 該預(yù)變性條件適合絕大多數(shù)擴(kuò)增反應(yīng)， 對于一些復(fù)雜模板， 例如：菌液、菌落（尤 其是酵母）的PCR 擴(kuò)增，預(yù)變性時間可適當(dāng)延長至 10 min，以提高預(yù)變性效果；
(4) 退火溫度請根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置。如果需要，推薦通過建立溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的*適溫度。此外，退火溫度直接決定擴(kuò)增特異性，如發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增特異性差，可適當(dāng)提高退火溫度。
(5) 關(guān)于延伸速率，當(dāng)目的片段長度不超過 3 kb 時，推薦使用 15 sec/ kb；當(dāng)目的片段長度大于 3 kb 時，推薦使用 30 sec/kb。延伸速率與模板復(fù)雜程度有關(guān)，如遇產(chǎn)率較低可適當(dāng)提高延伸時間。
注意事項
1. 本產(chǎn)品科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 本產(chǎn)品中2 x Taq PCR Plus Mix需融解*全后使用，防止離子濃度不均勻。
3. 建議將所有的反應(yīng)組分在冰上配制，最后加入2 x Taq PCR Plus Mix。
4. 使用基因組模板進(jìn)行較長片段擴(kuò)增需要使用高質(zhì)量純化的DNA模板，可以提高 PCR 成功率。
5. 本產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物可用于 T/A 克隆。由于本產(chǎn)品含有 Loading Dye，PCR 產(chǎn)物需經(jīng)過切膠回收后才可充分去除 Loading Dye。
6. 建議使用泡染法進(jìn)行電泳后染色，膠染法會導(dǎo)致紅色指示條帶發(fā)生彌散，不利于條帶指示，對藍(lán)色指示條帶無影響。藍(lán)色條帶在 1% TAE 緩沖液中遷移速率約等于1500 bp，紅色條帶在 1% TAE 緩沖液中遷移速率約等于100 bp。
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